SAMPAC :: Sociedad Andaluza de Microbiología y Parasitología Clínica

Espectrofotometría de masas

Identificación de especies o aislamientos por espectrofotometría de masas con o sin cultivo: pasado, presente y futuro.

Autor: Fox A.

Journal of Clinical Microbiology 2006; 44: 2677-2680.

Identificación de especies o aislamientos por espectrofotometría de masas con o sin cultivo: pasado, presente y futuro.

Autor: Fox A.

Journal of Clinical Microbiology 2006; 44: 2677-2680.

Resumen

El autor realiza una revisión de la utilidad de la espectrofotometría de masas (EM) en microbiología clínica. La minireview se estructura es tres apartados:
En el primero, se expone la aplicación clásica de la EM, el análisis de pequeñas moléculas, y su utilización en la identificación bacteriana tras cultivo. El perfil de ácidos grasos es aún considerado un â€œgold standardâ€ en taxonomía y es ampliamente utilizado en laboratorios de referencia, donde la cromatografía se puede asociar a con un EM, como ejemplo expone la diferenciación entre Bacillus anthracis y Bacillus cereus.
El segundo apartado lo dedica al presente de la EM en microbiología clínica, la identificación de moléculas grandes y su aplicación en la identificación bacteriana tras cultivo mediante MALDI-TOF (matiz-assisted laser desortion ionization-time of flight) y ESI (electrospray ionization) y su mayor ventaja, la no es necesidad de pretratamiento químico de la muestra, lo que favorece la interpretación de los resultados al analizarse las moléculas en su estado nativo.
En tercer lugar describe el futuro de la EM, la especiación bacteriana sin cultivo mediante EM-EM (espectrofotometría de masas en â€œtandemâ€), su asociación con la tecnología PCR, así como la investigación de infección en líquidos biológicos.
El autor concluye que actualmente el uso de la EM por parte de la comunidad microbiológica es desalentador y espera que este artículo contribuya a su difusión.

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Detección de una proteína de la cápside de norovirus, en extractos de heces mediante Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization and Nanospray Mass Spectrometry

Autor: David RC et al.

Applied and Environmental Microbiology 2006; 72 (4): 2749-2755.

Resumen:

Los autores estudian la utilidad de la espectrofotometría de masas aplicada al diagnóstico clínico y el uso de esta tecnología en la investigación de norovirus en muestras fecales. La detección de una proteína de 56 Kda perteneciente a la cápside del virus se realizó de tres formas: escaneando la proteína intacta, mediante técnicas de fingerpriting y mediante secuenciación de péptidos. La detección de la proteína intacta fue de poca utilidad debido a su baja sensibilidad y especificidad, la técnica de fingerpriting fue impracticable por interferencia de la muestra, sin embargo la técnica de secuenciación del péptido usando nanospray MS tandem permitió la detección de >=250 fmol de la proteína de la cápside (una cantidad menor de lo encontrado habitualmente en pacientes con infección).
Los autores concluyen que su estudio es la primera comunicación de la aplicación de la espectrofotometría de masas a la detección de norovirus en muestras clínicas y constituye un precedente de la aplicación de esta tecnología para futuros ensayos de detección de otros microorganismos.

Comentario:

Este comentario hace referencia a dos publicaciones (uno es una minireview y otro un artículo de investigación) donde se pone en evidencia la importancia que va adquiriendo la espectrofotometría de masas en el diagnóstico microbiológico. De forma simple, la espectrofotometría de masas es esencialmente una gradación de moléculas según su peso. Los equipos de EM constan de un ionizador (generalmente un láser), un analizador de masas que pone en evidencia las partículas aceleradas en tubo de vacío y un detector que mide la relación masa – carga (m/z). Clásicamente los analizadores de EM sólo podían utilizarse en la investigación de moléculas pequeñas y su aplicación en microbiología era puntual, sobre todo el análisis de ácidos grasos de la pared celular tras cromatografía. Con la aparición de los nuevos equipos de EM, aparecen los nuevos ionizadores tipo MALDI y ESI donde la ionización es mas suave y los nuevos analizadores de masa tipo TOF, cuádruplo, trampa iónica, etc. Esta nueva tecnología ha permitido emplear la EM en el análisis de moléculas mucho mas grandes y sobre todo con la tecnología de EM en tandem la posibilidad de secuenciación de péptidos. Lógicamente la aplicación actual de la EM es la proteómica, pero la posibilidad de estos nuevos equipos de analizar oligonucleótidos y productos PCR han encaminado la EM hacia la microbiología clínica (el artículo sobre norovirus es un ejemplo) y de hecho los primeros analizadores PCR-MS han empezado a utilizarse en investigación. Por último es interesante remarcar que la posibilidad de secuenciación de proteínas permite a estos equipos el estudio de microorganismos no secuenciados genéticamente y las proteínas encontradas pueden ser identificadas en bases de datos (BLAST o FASTA) o, sin son desconocidas, la información puede ser utilizada para clonar el gen correspondiente.
Este es el futuro, puede que en los siguientes años la tecnología PCR conviva con la espectrofotometría de masas en nuestros laboratorios.

Artículo comentado por: José A. Lepe. Hospital de Riotinto. Huelva.

Autor: José A. Lepe - Fecha: 01 Octubre, 2006 ( 08:06 h )

Tema: Comentarios a la literatura Microbiologica